C. trachomatis поражает от 5% до 10% населения и особенно часто встречается у молодых людей в возрасте до 25 лет. Это серьезная проблема для общественного здравоохранения из-за его распространенности и потенциальных серьезных долгосрочных последствий. Одна из основных причин такого распространения заключается в том, что в большинстве случаев (75% женщин и 50% мужчин) симптомы минимальны или отсутствуют, поэтому диагноз часто не диагностируется.
Инфекция связана с негонококковым уретритом у мужчин и несколькими воспалительными синдромами репродуктивного тракта у женщин, такими как воспаление шейки матки и воспалительные заболевания органов малого таза. Без лечения инфекция увеличивает риск внематочной беременности и является одной из ведущих причин женского бесплодия во всем мире.
В анализе используется амплификация рекомбиназной полимеразы (RPA), метод амплификации нуклеиновых кислот (NAAT) для обнаружения C. trachomatis непосредственно из образцов мочи.
Поскольку новый подход к анализу не требует очистки общей ДНК из образца мочи, отпадает необходимость в специализированном оборудовании. Процедура значительно менее трудоемка, требует меньше времени и, следовательно, дешевле. Он относительно прост в исполнении и поэтому может применяться во многих настройках POC.
«Анализ позволяет получить высокоспецифичный C. trachomatis со значительно улучшенными уровнями чувствительности по сравнению с доступными в настоящее время C. trachomatis POC ", – говорит Уло Лангель, доктор философии, профессор молекулярной биотехнологии Тартуского университета, Эстония, и профессор нейрохимии Стокгольмского университета, Швеция.
Существующие методы на основе полимеразной цепной реакции (ПЦР) для тестирования C. trachomatis широко применяются, но подходят только для использования в больницах с обученным персоналом и дорогостоящим оборудованием. Исследования показали, что до 50% пациентов никогда не возвращаются, чтобы получить результат диагностики или необходимое лечение.
Хотя уже разработано несколько тестов для быстрой диагностики, ни один из них не обеспечивает сопоставимой чувствительности с больничными методами. Недавние независимые исследования показали, что доступные в настоящее время тесты POC имеют чувствительность от 10% до 40%.
Первоначальный анализ эффективности нового анализа показал специфичность 100% и чувствительность 83%, что свидетельствует о его потенциальной надежности.
"Вызывает тревогу низкую производительность доступных тестов POC для C. trachomatis ограничила их более широкое использование, и существует явная потребность в более чувствительных и экономичных диагностических платформах. Следовательно, потребность в соответствующем тесте на месте, который предлагает достаточно чувствительное обнаружение », – заключает проф. Лангель.
ТЕХНИЧЕСКИЕ ДЕТАЛИ ИССЛЕДОВАНИЯ
Амплификация рекомбиназной полимеразы (RPA) – это метод амплификации нуклеиновых кислот (NAAT) – лабораторный метод, который включает синтез in vitro множества копий ДНК или РНК из одной исходной матрицы. Эти методы произвели революцию в диагностической технологии.
Современные технологии, позволяющие обнаруживать усиление в реальном времени, быстро становятся отраслевыми стандартами диагностики.
C. клетки trachomatis содержат плазмиды (небольшие молекулы ДНК, которые отделены от хромосомной ДНК), которые имеют ряд кодирующих последовательностей. Для идентификации и амплификации с помощью RPA исследователи выбрали фрагмент гена в гене (CDS2), который сохранялся в генах C, передаваемых половым путем. trachomatis штаммы. Анализ не требует очистки общей ДНК из образца мочи.
Нагревания образца в течение пяти минут при 90 ° C достаточно, чтобы высвободить достаточное количество мишени для амплификации, чтобы определить, присутствует ли патоген. Моча содержит ингибиторы полимеразной цепной реакции (ПЦР), но до 5 μл мочи можно добавить, не влияя на чувствительность RPA, тогда как добавление 10 μl значительно влияет на эффективность усиления.
C. trachomatis, разработанный здесь, смог обнаружить не менее 50 копий мишени CDS2.
C. trachomatis содержит в среднем от четырех до десяти копий плазмиды на элементарное тело в зависимости от штамма и стадии развития. Наименьшее обнаруживаемое количество C. trachomatis, таким образом, анализ RPA может быть транслирован на 5-12 патогенов на реакцию и находится в том же диапазоне, что и другие методы, основанные на амплификации нуклеиновых кислот.
Анализ был протестирован на образцах мочи 70 пациентов (51 женщина и 19 мужчин), посещающих клинику сексуального здоровья в Эстонии. Образцы тестировались параллельно с использованием RPA и Roche Cobas Amplicor C. trachomatis анализы.
Пятьдесят восемь образцов дали отрицательный результат в обоих анализах. Поскольку ложноотрицательных результатов не обнаружено, клиническая специфичность теста C. trachomatis RPA можно оценить на 100%.
Двенадцать образцов были признаны положительными с помощью анализа Рош. Из них 10 дали положительный результат и два дали отрицательный результат на RPA-реакцию.
На основании этих результатов клиническую чувствительность анализа RPA можно оценить в 83%.
Из 12 пациентов с положительным результатом трое жаловались на симптомы. У остальных девяти пациентов симптомы отсутствовали. Из 58 C. trachomatis-отрицательные пациенты, 15 (26%) жаловались на симптомы, которые могли быть связаны с C. trachomatis инфекция.
Один из них дал положительный результат на N. gonorrhoeae и M. гениталий. Другим был поставлен диагноз воспаления мочевого пузыря (два пациента), бактериального вагиноза (пять пациентов), дрожжевой инфекции (четыре пациента) или боли в животе негинекологического происхождения (три пациента).