«Ученые всего мира прямо сейчас используют CRISPR в своих исследованиях, но эта технология не так функциональна, как могла бы», – говорит Хаоцюань Ву, доктор философии.D., кто усовершенствовал процесс и является ученым-биомедиком в Центре медицинских наук Техасского технологического университета в Эль-Пасо (TTUHSC, Эль-Пасо).
CRISPR – это революционная технология, которая позволяет ученым изменять гены. Два ключевых компонента делают возможным редактирование ДНК CRISPR. Первый – это Cas9, фермент, способный разрезать ДНК.
Второй компонент – это единственная направляющая РНК, которая указывает Cas9, какую именно часть штамма ДНК нужно вырезать, чтобы деактивировать нежелательный участок.
Однако CRISPR как новая технология нуждается в улучшении. Способность технологии удалять или нокаутировать гены несовместима.
Эти проблемы заставили Ву задуматься, может ли он улучшить общую способность CRISPR нацеливать и устранять гены.
«Я бы не сказал, что с CRISPR что-то не так, но я бы сказал, что есть много возможностей для улучшения, поскольку это новая технология», – объясняет он. "И мы хотели проверить, можем ли мы сделать это лучше, изменив единственную направляющую РНК."
Идея окупилась.
В недавней статье, опубликованной в Genome Biology, Ву и его команда исследователей TTUHSC в Эль-Пасо описывают, как им удалось достичь эффективности нокаута более чем на 50 процентов, настроив последовательность шаблона единой направляющей РНК. Исследователи специально расширили его на 5 пар оснований. Также были изменены другие характеристики дуплекса.
«Степень повышения эффективности нокаута с этими изменениями была поразительной», – говорит Ву. "Это поможет уменьшить опасения, что эксперименты с нокаутом могут не работать, а также значительно повысит эффективность более сложных процедур редактирования, таких как удаление гена."
Команда TTUHSC Эль-Пасо, в которую вошли значительный вклад постдокторского исследователя Инь Данга, доктора философии.D., планирует продолжить изучение этого модифицированного единого шаблона РНК, чтобы лучше понять, почему он улучшает функциональность CRISPR. Они также подали заявку на патент на свой новый метод, который, как они надеются, будет принят другими учеными, использующими CRISPR.